pbr322质粒图谱解读(pbr322质粒的起点ori来源于)

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有趣的版本

想听易公石曾经拜访过的石勇教授：“他刚进我实验室的时候，连PCR都不会！”PCR的地方太TM了！PCR的全称是聚酶链式反应，简单来说就是利用人工技术不断DNA并使其发生变化，两个，两个，更多。自然状态下提取的DNA样本通常含量相对较低，通常用于PCR扩增后的检测、测序和杂质操作。PCR与实验无关，但有必要说一句，PCR技术不算太多。PCR技术发明者的灵感来源更是令人着迷。PCR技术源于“浪潮”1983年，塞特斯Biocipes的工作人员和女同事凯莉穆利斯因某种疼痛而约会。当药物在高速公路上行驶时(危险动作，不要模仿)，路边两排路灯的眼睛幻觉使DNA双链，并保持在他面前的离器，拉伸.Skin意识到他找到了放大DNA的方法！穆利斯认为他可以参与一个大新闻。他去公司汇报了自己的想法。领导惊呆了：“TMD搞公司和女人的关系，医学，面子吧？"领导同意了。首先，他被分配了一份查封的工作。如果他不会吹嘘PCR技术，那就让他收拾包裹吧。对了，莫里斯的前两份工作分别是自由撰稿人和蛋糕店店员(店主是他的前妻)。如果这份工作丢了，他真想吃了它。在这种情况下，穆利斯还不忘跟公司讨价还价：“我的创造者太可怕了。能不能派几个技术人员来帮我？”公司领导：“少，你不是博士学历，还复自然？”穆利斯：“但我的本性是关于宇宙学的！”情况：穆利斯在加州大学伯克利分校学习(综行为)，晚上住宿舍。有一次，他有一种药，他看到了想象中的宇宙大爆炸。他醒来后写了一篇理论论文，向大自然解释大爆炸宇宙，结果是真的。我看到他给大自然博士学位(博士延期，不能毕业，不要模仿，否则后果自负)。公司领导听了，好人，药自然能送。这种药的幻觉？所以我给他派了三个技术员，帮他开发PCR技术。1984年11月，这些技术人员完成了次PCR实验，对49bp的DNA片段进行了10个PCR循环的和扩增。“酶”女助生物狗知道，PCR循环主要分为三步：变性、退火、延伸。首先，DNA的双螺旋结构在高温下进行，将两条互补的链分离成一条单链；然后，降低温度使引物与单链DNA结；，DNA聚酶之后是引物，另一条互补链，DNA完成。在穆利斯的PCR技术中，DNA聚酶最初是大肠杆菌DNA聚酶使用的，但这种酶不耐高温，在高温下失活。因此，技术人员应该在每个PCR循环的退火阶段添加聚酶，允许它们DNA，然后到达下一个循环。这些聚物在高温变性阶段失活，高温后才能加入新的聚酶。这样不仅麻烦(不然穆利斯也用不着这么多人)，而且成本很高(生物狗都知道酵素贵)。穆利斯也认为不是这样的，提出改变高温DNA聚酶，高温不会失活，这样整个PCR过程只需要添加酶。有这种高温酶吗？我真的想！有一个大棱镜温泉(又称大温泉)，是美国的温泉，也是美国第三大温泉。水温高达85，春天这种热的特异性是水面呈现蓝、绿、黄、橙、橙、红等颜色，如棱镜反射的阳光。热棱镜温泉就像苏王秀兰的彩虹色，其实是纯色。这个温泉中有大量的气孔细菌，它们也能在高于85的高温下生存，它们的体内含有各种色素，使温泉呈现出各种颜色。1973年，来自台湾省的女孩钱嘉韵去美国学习。她从辛辛那提大学的生物研究中提取高温DNA聚酶，研究生物棱镜的生物研究。但是当时还没有发明PCR技术，所以高温DNA聚酶也没有用武之地。

这个关于钱嘉韵的研究，刚签了一篇研究论文。但这篇文章却成了穆利斯的灵感。1986年，按照钱描述的方法，仅用了三周的高温DNA聚酶就被成功提纯并用于PCR，效果惊人。这种聚酶不仅大大简化了PCR工作，而且比以前使用的酶具有更强的特异性和活性。塞特斯高兴地向詹姆士沃森(DNA双螺旋结构的发现之一)了穆利斯。沃森见到穆利斯给了他一种惊艳的感觉，并邀请他去冷泉实验室参加“人类分子生物学”的会议，报告PCR原理和实际应用结果。这是穆瑞斯次邀请介绍并参与学术大牛。“机”友现在的PCR操作很简单。加入管道后，你就可以愉快地在PCR仪中携带胶水进行几十个循环。PCR仪运行后的一两个小时内，勤快的生物狗可以做一些其他的实验。懒的话就摸鱼看电影玩游戏。不过MUS当时没有PCR仪，所以当时做了一个实验，就是这样：三个温度下三个水浴温度恒定。

：高温变性温度，退火温度，延长温度，然后放入PCR管小篮子，把它放在高温转基因水浴中，估计十秒钟后几乎几秒钟，然后将篮子放在火浴中，然后在几秒钟内浸泡，然后在水浴中延伸到数十秒。反应一个循环，你必须打扰三个水浴中的篮子。数十个周期，技术人员的手摇晃如帕金森。为了减少这些生物移徙工人的劳动力量，Cetus于1988年发明了个PCR自动化热循环仪器，而PCR技术实现自动化，PCR技术人员也失业......具有高温DNA聚酶和两个主要魔法对PCR，PCR技术已经很好地使用。 1989年，科学杂志报道了一种PCR技术和高温DNA聚酶，Cetus也与Roche作，使用PCR技术进行临床诊断。 1991年，Roche Pharmaceuticals购买了3亿美元的Cetus PCR技术专利。这是20世纪90年代初期的3亿美元！然而，这一巨额金额的巨额资金，因为1985年，当PCR技术的结果时，Cetus敦促骡子使这种技术写这项技术，但Mulis的土着电脑游戏太懒了很长时间，公司允许技术人员写一篇论文来说科学，平等的严重阻力患者穆斯蒂斯终于写了一个良好的，纸上的PCR不是新鲜的。 Mulis说，该公司其他人抢劫了他们的学分。在参加Watson的“人类分子生物学”会议后，他们离开了。当Mulis辞职时，他只花了10,000美元和五个月的薪水。未来PCR技术的巨额利润没有任何作用。他后来转过几项杀生物剂，靠在“PCR发明人”的名字上，并混了一碗米饭。他一直在挥手，它仍然着迷，1993年清晨，他通过一群记者冲浪，他知道他赢得了诺贝尔技术的奖励！MUS突然出来，名声和财富，变得越来越多，他砸了第四任妻子，并写了一个名为“心脏和舞蹈”的名字。我什么都不知道。积极的书......虽然PCR库存故事是如此狗血，但这种技术确实促进了生物学的进步。所以，只要你能做出奖励的结果，你也可以挥手（但你不能得到药）！

管辖权

现在让我们回到1953年，双重螺旋的年份发现。那一年，Kary Mullis已经8岁了，这是加入山上山丘的年龄。 1944年，Schr?dinger于1944年发布了“生是什么”。当然，他不明白这种生物学工作，并且不可能理解DNA结构并不意味着什么。事实上，他对生物学并不感兴趣。Kary Mullis在化学领域非常有才华，而不是生物。在青少年的时代，他偷了家里的糖，与药房买的硝酸钾混，以及他自己的自制火箭;在佐治亚理工学院化学学位研究期间，他经常成有毒物质和爆炸。 。非常幸运，几乎没有人，那时候让mullis掌握了许多化学知识。那么为什么他选择生物化学作为下一个研究方向？ Mullis Readmes只对小分子感兴趣，而PCR的DNA仍然是“稳定”，并且完全与他最喜欢的化学成束缚。在完成硕士医生后，我在加利福尼亚大学读了六年的生物化学，并于1972年毕业。幸运的是，乔尼德斯非常宽容，他不限制学生选择，所以Mullis选出了天体的理物理。奇的是，即使在1968年，他可能会在本课程中学会很好，1968年被评为“自然”的论文，在“自然”中发布。感谢这篇论文，或者如果他害怕你无法获得博士学位。Mullis不应该认为毕业后，Mullis不想做任何事情，所以他们带着威尔夫来到堪萨斯州。起初他想成为一名作家（痴迷是非常深刻的，真的有一本书），但不幸的是没有人才。随后他在医院工作了一段时间，而且由于两年餐厅经理离婚后伯克利。在这里提到一个好朋友Tomas White，这位朋友说服了他回到学校继续，而且白色将他介绍给Cetus，后来穆利斯难以站起来。穆利斯来到加州大学旧金山学习药物化学的博士后研究。在研究期间，他了解到，DNA也可以通过化学方法成。 Mullis对此感兴趣。 1979年，当他来到Cetus时，它还负责成来自公司其他部门的寡核苷酸和用过的同事。 Mullis确实有化学成的人才，并且他很快就制作了计算机自动成过程，并且大大简化了工作流程。 1981年，他成为实验室负责人。高速公路128在1983年的晚上，Mullis在周末向旧金山与旧金山的Cetus一起使用的女朋友。这辆车在绕组的128道路上行驶。此时，在Mullis的心现一个想法 - 当DNA片段被扩增时，如果添加两个引物，则添加司法链和反义链，然后只要底漆足够，可以扩展无限制环形！ Mullis立即停止，纸张被拔出。该扩增方法，所获得的DNA每个循环是一个循环的两倍，然后循环10次DNA可以放大1000次，循环可达到10亿次！这个数字太惊人了，这个想法太简单了，Mullis无法相信时间，之前，他以前从未尝试过。在他多次包含这些信息后，他在Cetus内的研究会议上分享了他的思考。然而，同事不认为这是惊人的奇怪。 Mullis花了几个月的时间来寻求认可，但他的角度很少有科学家。在此期间，他也与他的女朋友崩溃，直到9月，他开始了个实验。如果DNA将继续处于注释奖励中的票据奖，则Mullis提到他不想重复劳动力。如果有一件事需要做同样的过程，他将倾向于编写一个计划来解决。那天晚上，他在加入试管后拿了聚酶，他接近家里。他充满了DNA，在管中加倍。但是，第二天，Mullis未能看到凝胶中的预期条带。他不得不承认加热，冷却，加入一个聚酶，这些酶被捕获到过去。在接下来的三个月里，Mullis磨损了实验，同时，它被攻击了情绪问题。，在雪中，他终于实现了25bp长片段，扩增了pBR322质粒，并失去了爱情。开始结束事情并不顺利。 1984年，Mullis再次在Cetus的会议上报道了自己的结果，结果仍然感兴趣。同样在这次会议中，Mullis和另一个同事有一个口角，升级到肢体冲突。这种紧急致力于Mullis，另一个人将离开公司。 Mullis的朋友白人一直是Cetus的技术副总裁。他帮助Mullis将一个小组拉到学习PCR，被名为日本人名为天赋。我不知道日本人是否是严格的，勤奋。该集团建立后，研究迅速促进，并成功扩展了110磅人蛋白基因片段。经过更多的尝试使得更多的尝试，研究人员决定写两篇论文，Mullis导致PCR技术理论和人才的应用。 PCR技术的应用。出于某种原因 - 提交人认为，当纸张的论文写入时，Mullis延迟癌还致力于，Mullis几乎没有笔。在前几个部分中，我们提到了Cetus正在调查IL-2，并且该公司渴望从研究公司转变给制药公司。没有技术技术，不能出现。高级别等不及Mullis完成论文，并敦促人才木材并首先赶快向申请文件转发。 12月份，才华横溢的木材发表于“科学”，该局部是“酶扩增扩增扩增和β-珠基因组序列的限制性位点分析”。Mullis的论文并不那么好。他抛出了“自然”和“科学”，因为内容不是“原始”被拒绝，，直到1987年之前没有进行“酶法”[14]。同年，Cetus的另一组科学家们还向PCR的演变添加了砖块。初始版本的PCR使用来自大肠杆菌的DNA聚酶。该酶不耐热，必须重新添加每个循环，这大大降低了自动化程度。Cetus是由Cetus和Perkin-Elmer开发的，因为必须连续添加DNA聚酶，该组酶使用从分离聚酶从察里胶中分离聚酶的概念和机器人运动。未定，，这项工作是大卫格尔福兰德和苏珊娜斯托福特。从Thermulus Aquaticus从Thermulus Aquaticus中分离出两种科学家，秋天到TaqDNA聚酶在95℃下仍然在高温下灭活，并且立即将Taq酶施加到PCR上。这是我们现在使用PCR的情况。1986热循环仪器原型幻想爱似乎PCR已经过去了最困难的时刻，是时候享受荣耀和荣耀了。但是，我不知道为什么，很多苦，很难聚在一起。一方面，它是PCR发明人的身份争端;另一方面，Cetus也对PCR团队并不公平。虽然Mullis收到了10,000美元的奖金，但该团队中的其他人只有象征性地收到一美元。这使得它们与其他团队之间有很大的区别。 1986年，Mullis选择离开Cetus。 1991年，Cetus在梦中精致; 1992年，PCR专利为3亿美元，前往新东霍夫曼 - 拉罗什; 1993年，Mullis Mount Nobel Job 1，谈论童年和128高速公路。Mullis和PCR的故事实际上差不多完成。在他的一生中，Mullis显示了很多不那么高的便条获奖者。 Mullis反复提到诺贝尔的女朋友，甚说屡获殊荣的快乐失去了这个女孩的悲伤 - 即使已经十年前的时候 - 表达了一个迷恋，他有四个婚姻在他50之前岁。据说他不是那么保守的男女，并且还造成了公司的问题。白色描述了Mullis作为充满创造力的角色，但一些太平洋的角色[16]。穆利斯才华横溢，没有恐惧权威，但另一方面，他不是那么自律，实验将被断绝，这是他不能在Cetus内记入贷方的原因之一。两者的友谊未能继续，但是白色站在穆利斯的一侧。 Mullis仍然少于桌子上的小爱好。 1938年，Albert Hofmann成了LSD。十年后，这种物质被引入精领域，然后在几年内成为年轻人最着名的时尚小工具，成为最着名的历史。执行器[17]。 Mullis只是一个美好的时光 - 这就是他告诉霍夫曼 - 而Mullis认为LSD带来的幻觉帮助他在128高速公路上找到了PCR的启示。 Mullis仍然不那么像科学家。例如，他认为艾滋病毒病毒并不是有助于的原因，全球变暖是一个伪主张;他认为，占星术，相信转世，并声称他与荧光浣熊的外星人对话。还有一个有趣的细节。在“分子生物学杂志”上发布了纸张的前置手机首先提到了修复的概念，并提到了双引号。人文医师保罗彩虹已经写了一本书“制作PCR：一个生物技术的故事”，详细介绍了整个PCR的发现故事，在1969年，Kleppe公开发表了这个观点，有一个名叫的斯图尔特·斯图尔特·林恩科学家当时。这是艰难的，这位科学家在加利福尼亚大学期间读一名教师，林恩也确实在课堂上表现出了Kleppe的想法。实验成功了。因此，Rainbow认为Mullis可能只是“追随者”，而不是“先驱”。 Mullis是一个“好人”？我们不知道。但PCR，真的改变了世界。

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